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產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST

Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶(8U/ul)

簡(jiǎn)要描述:

Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶(8U/ul)公司正在出售的產(chǎn)品:喉癌細(xì)胞 類(lèi)胡蘿卜裂解雙加氧8封閉多肽 螺旋體通用PCR檢測(cè)試劑盒 大鼠內(nèi)皮型合成(eNOS)ELISA Kit 果糖1,6二磷(FBP)/果糖1,6二磷酯活性比色法檢測(cè)試劑盒 舞蹈擬土地桿菌 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體

更新時(shí)間:2024-01-12

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Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶(8U/ul)

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

A-PJ1004

Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶(8U/ul)

1600U

A-PJ1004

Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶(8U/ul)

16KU

Bst 4.0 DNA/RNA Polymerase 為Bst 3.0 DNA 聚合酶和極其耐熱的ThermoStable V RTase反轉(zhuǎn)錄酶(耐受65°
C)的混合品,該酶適合于RNA的LAMP 反應(yīng)。與Bst 3.0NA/RNA聚合酶相比,其反轉(zhuǎn)錄活性提高了近100倍,可以檢測(cè)低靈敏度的RNA分子。該酶在以RNA為模板的LAMP實(shí)驗(yàn)中,做為推薦用酶,其擴(kuò)增能力高于Bst 3.0 DNA/RNA聚合酶。除此外,該酶同樣可以進(jìn)行DNA模板的LAMP擴(kuò)增。
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酶含量:
1 μl 的 Bst 4.0 DNA/RNA Polymerase 中包含 8 U 的 Bst 3.0DNA Polymerase 和 20U 的 ThermoStable V RTase。
儲(chǔ)存:-20℃ 可保存 3 年。
典型的 LAMP 反應(yīng)
1. 按以下組分配制 LAMP 反應(yīng)液
Bst 4.0 DNA/RNA Polymerase (8 U/μl) 0.25~1 μl
10×Isothermo Buffer(Mg2+ free) 2.5 μl
100 mM Mg2+ X μl
dNTP Mixture (10 mM each) 3.5 μl
模板 DNA/RNA 10ng~1 μg
*10X Primers 2.5 μl
ddH2O Up to 25 μl
*10X Primers:16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4-8 μM LpF/B each。
2. 65°C 30~60min; 85°C 5min 失活。
使用注意事項(xiàng):
(1) Mg2+的使用濃度為 4~10 mM 濃度,Isothermo Buffer中沒(méi)有 Mg2+,通常情況下,在 6-8 mM Mg2+條件下可獲得較好的 LAMP 結(jié)果。
(2) 有文獻(xiàn)報(bào)道加入 Tte Uvrd 解旋酶可改善 LAMP 的效果。
(3) 使用無(wú)模板 DNA 作為對(duì)照檢測(cè)擴(kuò)增的特異性。

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PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備?

試劑:
模板DNA:PCR反應(yīng)需要模板DNA,如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等;引物:PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物,分別與模板DNA的兩端配對(duì)擴(kuò)增所需的特定區(qū)域,引物也可以合成為T(mén)A克隆等過(guò)程中使用到的引物;dNTPs:PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥(niǎo)苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細(xì)胞分裂、DNA合成等生物學(xué)過(guò)程,用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增;Taq DNA聚合酶:PCR反應(yīng)需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類(lèi)的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴(kuò)增DNA鏈;PCR buffer溶液:對(duì)PCR反應(yīng)具有緩沖作用,調(diào)節(jié)反應(yīng)pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛,可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性,從而提高反應(yīng)效率;酶切體系:PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測(cè)序等等實(shí)驗(yàn)步驟,常常需要進(jìn)行酶切操作。MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn),用來(lái)判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物;
設(shè)備:
PCR儀:用于控制反應(yīng)溫度,保證PCR反應(yīng)時(shí)不同溫度環(huán)節(jié)的嚴(yán)格控制;電泳槽:用于分離PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;核酸提取儀:從組織樣本中全自動(dòng)提取核酸。  這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是,只有在有序齊全的基礎(chǔ)上,才能進(jìn)行PCR反應(yīng)并得出準(zhǔn)確結(jié)果。

PCR相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn):

PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)由20到35個(gè)循環(huán)組成,每個(gè)循環(huán)包括以下3個(gè)步驟:

一、變性:

利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個(gè)循環(huán)之前,通常加熱長(zhǎng)一些時(shí)間以確保模板和引物分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時(shí)間1-2分鐘,接下來(lái)PCR儀就控制溫度進(jìn)入循環(huán)階段。

二、退火或稱(chēng)接合,復(fù)性:

在DNA雙鏈分離后,降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點(diǎn)5℃。錯(cuò)誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯(cuò)誤地結(jié)合。該步驟時(shí)間1-2分鐘。

三、延伸:

DNA聚合酶由降溫時(shí)結(jié)合上的引物開(kāi)始沿著DNA鏈合成互補(bǔ)鏈。此階段的溫度依賴(lài)于DNA聚合酶。該步驟時(shí)間依賴(lài)于聚合酶以及需要合成的DNA片段長(zhǎng)度。傳統(tǒng)的Taq估計(jì)合成1000bp/min、較新的Tbr(來(lái)自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

PCR反應(yīng)條件優(yōu)化:

1、變性溫度和時(shí)間:

保證模板DNA解鏈?zhǔn)潜WC整個(gè)PCR擴(kuò)增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C, 30~60s,再?gòu)?fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過(guò)高或高溫持續(xù)時(shí)間過(guò)長(zhǎng),可對(duì)Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

2、復(fù)性溫度和時(shí)間:

PCR擴(kuò)增特異性取決于復(fù)性過(guò)程中引物與模板的結(jié)合。復(fù)性溫度越高,產(chǎn)物特異性越高。復(fù)性溫度越低,產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。

3、延伸溫度和時(shí)間:

一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個(gè)核苷酸時(shí),過(guò)高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合,可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應(yīng)時(shí)間,可根據(jù)待擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度而定,小于1kb, 1min足夠;大于1kb需加長(zhǎng)延伸時(shí)間。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時(shí)間。這里需要注意,延伸時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能出現(xiàn)非特異擴(kuò)增。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時(shí)間。

4、循環(huán)數(shù):

其他參數(shù)選定后,PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。理論上說(shuō)20?25次循環(huán)后,PCR產(chǎn)物的積累即可達(dá)到最大值,實(shí)際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達(dá)到100%,因此不管模板濃度是多少,20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多,非特異擴(kuò)增增加。

公司正在出售的產(chǎn)品:

人鼻病毒9 染料法熒光定量PCR試劑盒

布魯氏菌抗體IgGELISA試劑盒 Brucella Ab IgG免費(fèi)代測(cè)試劑

禽波氏桿菌 染料法熒光定量PCR試劑盒

雞胚致死孤兒病毒PCR檢測(cè)試劑盒直銷(xiāo)

程序性死亡因子配體1ELISA試劑盒 PD-L1/CD274免費(fèi)代測(cè)試劑

利什曼原蟲(chóng)通用PCR檢測(cè)試劑盒直銷(xiāo)

轉(zhuǎn)基因植物NPTⅡ基因PCR檢測(cè)試劑盒

型膠原C

貓?jiān)葱猿煞?/span>(Feline)核檢測(cè)試劑盒

單增李斯特菌prfA基因熒光PCR檢測(cè)試劑盒(探針?lè)?/span>)

促分裂原活化蛋白激激活的蛋白激3ELISA試劑盒

貓?jiān)葱猿煞痔结樂(lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

馬痘病毒探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

蛋白二硫鍵異構(gòu)ELISA試劑盒

溶血梭狀桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

禽肺病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

蛋白激活受體1ELISA試劑盒

甲型流感病毒N1亞型(IAV-N1)核檢測(cè)試劑盒

病毒H9N2亞型(AIV-H9N2)核檢測(cè)試劑盒(雙重?zé)晒?/span>PCR法)

淀粉βELISA試劑盒

皮欽德病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

馬杜拉分枝菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

端粒保護(hù)蛋白1ELISA試劑盒

流行性出血熱病毒RT-PCR試劑盒

馬肺炎病毒探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

多肽-N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移12ELISA試劑盒

鳥(niǎo)類(lèi)髓細(xì)胞瘤病毒探針?lè)晒舛?/span>RT-PCR試劑盒

禽副粘病毒4PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格

發(fā)動(dòng)蛋白3ELISA試劑盒

貓瘟病毒(FPV)PCR檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR)

藍(lán)舌病病毒8型探針?lè)晒舛?/span>RT-PCR試劑盒

人富組蛋白(histatin-5)ELISA試劑盒

諾如病毒型PCR檢測(cè)試劑盒

歐洲棕色野兔綜合癥病毒PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格

人類(lèi)似RIKENcDNA2010109K09基因檢測(cè)試劑盒elisa

蒼耳子染料法PCR鑒定試劑盒

雞減蛋綜合征病毒-1976探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶(8U/ul)人彈性蛋白2,中性粒細(xì)胞(ELA2)試劑盒ELISA

中間普雷沃菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

折光馬爾太蟲(chóng)探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

U1小核核糖核蛋白A(SNRPA)ELISA試劑盒

偽結(jié)核棒桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

病毒N亞型(AIV-N)核檢測(cè)試劑盒

人補(bǔ)體7(C7)ELISA試劑盒

皮炎外瓶霉PCR檢測(cè)試劑盒

 


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