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Fast Taq DNA Polymerase(快速擴(kuò)增聚合酶)

簡要描述:

Fast Taq DNA Polymerase(快速擴(kuò)增聚合酶)公司正在出售的產(chǎn)品:ECV-304-RFP 脂聯(lián)封閉多肽 禽類肉瘤病毒PCR檢測試劑盒 大鼠可溶性CD14(sCD14)ELISA Kit 丙酮(PA)含量活性比色法檢測試劑盒 一品紅尾孢(一品紅褐斑病菌) IQCK蛋白抗體

更新時間:2024-01-12

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Fast Taq DNA Polymerase(快速擴(kuò)增聚合酶)

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

A-Hc2087

Fast Taq DNA Polymerase(快速擴(kuò)增聚合酶)

500U

儲存條件:-20℃保存

制品說明:

         Fast Taq DNA Polymerase 是經(jīng)過基因改造的可以快速擴(kuò)增的DNA聚和酶。Fast Taq DNA Polymerase具有5′→3′DNA聚合酶活性和5′→′外切核酸酶活性,無3′→5′外切酶活性。在PCR反應(yīng)中,F(xiàn)ast Taq DNA Polymerase延伸速度為2 kb/20sec,產(chǎn)物3′端帶A,可直接用于TA克隆。

活性單位:1單位(U)Fast Taq DNA Polymerase 活性定義為在74℃、30分鐘內(nèi),以活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板引物,將10 nmol脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質(zhì)所需的酶量。

質(zhì)量控制:SDS-PAGE 檢測純度大于99%,經(jīng)檢測無外源核酸酶活性;PCR方法檢測無宿主殘余DNA,能有效地?cái)U(kuò)增人基因組中的單拷貝基因;室溫存放一周,無明顯活性改變。

酶貯存緩沖液:

    20mM Tris-HCl (pH8.0), 0.1 mM EDTA, 1mM DTT, 100 mM KCl, Stabilizers, 50% glycerol。

        5×Fast Taq Buffer:

       100 mM Tris-HCl (pH 8.4),100 mM KCl, 50 mM(NH4)2 SO4,7.5 mM MgCl2以及其他成分。

適用范圍: 一般用于DNA片斷的PCR擴(kuò)增、DNA標(biāo)記、引物延伸、序列測定、平末端加A 等,產(chǎn)物可以直接用于TA載體克隆。

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PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備?

試劑:
模板DNA:PCR反應(yīng)需要模板DNA,如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等;引物:PCR反應(yīng)的兩個引物,分別與模板DNA的兩端配對擴(kuò)增所需的特定區(qū)域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;dNTPs:PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細(xì)胞分裂、DNA合成等生物學(xué)過程,用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增;Taq DNA聚合酶:PCR反應(yīng)需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴(kuò)增DNA鏈;PCR buffer溶液:對PCR反應(yīng)具有緩沖作用,調(diào)節(jié)反應(yīng)pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛,可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性,從而提高反應(yīng)效率;酶切體系:PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實(shí)驗(yàn)步驟,常常需要進(jìn)行酶切操作。MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn),用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物;
設(shè)備:
PCR儀:用于控制反應(yīng)溫度,保證PCR反應(yīng)時不同溫度環(huán)節(jié)的嚴(yán)格控制;電泳槽:用于分離PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;核酸提取儀:從組織樣本中全自動提取核酸。  這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是,只有在有序齊全的基礎(chǔ)上,才能進(jìn)行PCR反應(yīng)并得出準(zhǔn)確結(jié)果。

PCR相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn):

PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)由20到35個循環(huán)組成,每個循環(huán)包括以下3個步驟:

一、變性:

利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環(huán)之前,通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘,接下來PCR儀就控制溫度進(jìn)入循環(huán)階段。

二、退火或稱接合,復(fù)性:

在DNA雙鏈分離后,降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點(diǎn)5℃。錯誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯誤地結(jié)合。該步驟時間1-2分鐘。

三、延伸:

DNA聚合酶由降溫時結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補(bǔ)鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統(tǒng)的Taq估計(jì)合成1000bp/min、較新的Tbr(來自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

PCR反應(yīng)條件優(yōu)化:

1、變性溫度和時間:

保證模板DNA解鏈?zhǔn)潜WC整個PCR擴(kuò)增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C, 30~60s,再復(fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續(xù)時間過長,可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

2、復(fù)性溫度和時間:

PCR擴(kuò)增特異性取決于復(fù)性過程中引物與模板的結(jié)合。復(fù)性溫度越高,產(chǎn)物特異性越高。復(fù)性溫度越低,產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。

3、延伸溫度和時間:

一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時,過高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合,可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應(yīng)時間,可根據(jù)待擴(kuò)增片段的長度而定,小于1kb, 1min足夠;大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時間。這里需要注意,延伸時間過長可能出現(xiàn)非特異擴(kuò)增。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時間。

4、循環(huán)數(shù):

其他參數(shù)選定后,PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環(huán)后,PCR產(chǎn)物的積累即可達(dá)到最大值,實(shí)際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達(dá)到100%,因此不管模板濃度是多少,20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多,非特異擴(kuò)增增加。

公司正在出售的產(chǎn)品:

人乳頭瘤病毒14 染料法熒光定量PCR試劑盒

蛋白酪氨磷ELISA試劑盒 PTP/PTPase/CD148免費(fèi)代測試劑

奮森疏螺旋體染料法熒光定量PCR試劑盒

半枝蓮染料法PCR鑒定試劑盒

不均一核核糖核蛋白KELISA試劑盒 HNRPK免費(fèi)代測試劑

甲型流感病毒11亞型PCR檢測試劑盒供應(yīng)

玉米BT PCR檢測試劑盒

冠狀病毒ELISA試劑盒

綿羊莫拉菌探針法熒光定量PCR試劑盒

阪崎腸桿菌rpsU-dnaG 基因間序列(78bp)常規(guī)PCR檢測試劑盒

層粘連蛋白β2ELISA試劑盒

綿羊莫拉菌探針法熒光定量PCR試劑盒

輪狀病毒通用染料法熒光定量RT-PCR試劑盒(停)

大腸菌ELISA試劑盒

胞桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

禽正呼腸孤病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

膽綠還原BELISA試劑盒

豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒前病毒PCR檢測試劑盒

青蟹雙順反子病毒PCR檢測試劑盒

蛋白酪氨激2βELISA試劑盒

牛腺病毒3型 染料法熒光定量PCR 試劑盒

鹿源性成分(Deer)核檢測試劑盒

登革熱抗體ELISA試劑盒

羅斯肉瘤病毒RT-PCR試劑盒

流行性肋腺炎病毒PCR檢測試劑盒

丁型肝炎IgGELISA試劑盒

南定病毒核檢測試劑盒

禽皰疹病毒型PCR檢測試劑盒

多肽-N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移5ELISA試劑盒

綿羊附紅細(xì)胞體探針法熒光定量PCR試劑盒

口蹄疫病毒A亞型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

人谷氨[NMDA]受體亞基ε-2(NR-2)ELISA試劑盒

牛丘疹性口炎病毒PCR檢測試劑盒說明書

茜草染料法PCR鑒定試劑盒

8-異構(gòu)前列腺F2α(8-epi-PGF2α)ELISA檢測試劑盒

大棗探針法PCR鑒定試劑盒

彌散黏附性大腸桿菌(大腸埃希菌)染料法熒光定量PCR試劑盒

Fast Taq DNA Polymerase(快速擴(kuò)增聚合酶)-3(PON3)試劑盒ELISA

卵形瘧原蟲PCR檢測試劑盒

伊氏李斯特菌PCR檢測試劑盒

S100鈣結(jié)合蛋白A11(S100A11)ELISA試劑盒

鰓霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒

志賀菌ipaH 基因熒光PCR檢測試劑盒(探針法)

人苯諾龍/苯去甲(NP)ELISA試劑盒

牛細(xì)小病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

 


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