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石蠟組織基因組 DNA 快速提取試劑盒

簡(jiǎn)要描述:

石蠟組織基因組 DNA 快速提取試劑盒公司正在出售的產(chǎn)品:人前列腺上皮細(xì)胞 半胱氨亞磺脫羧封閉多肽 變形絲囊霉菌PCR檢測(cè)試劑盒 大鼠抗促甲狀腺受體抗體(TRAb)ELISA Kit α葡萄糖苷(α GC)活性比色法檢測(cè)試劑盒 瓜枝孢(黃瓜黑星病菌) 鋅指蛋白471抗體

更新時(shí)間:2024-01-12

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石蠟組織基因組 DNA 快速提取試劑盒

商品屬性:

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

貨號(hào)

石蠟組織基因組 DNA 快速提取試劑盒

50

A-Hc2041

保存條件:本試劑盒在室溫儲(chǔ)存12個(gè)月不影響使用效果。

產(chǎn)品介紹:

 本試劑盒采用二甲苯脫蠟方法。裂解液/蛋白酶K 迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶,然后基因組 DNA 在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜, 再通過(guò)一系列快速的漂洗-離心的步驟,抑制物去除液和漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。

產(chǎn)品特點(diǎn):

1.重復(fù)性好:離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界有名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小。克服了國(guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。

2.多次柱漂洗確保高純度,OD260/OD280典型的比值達(dá)1.7~1.9,可直接用于PCR,Southern-blot和各種酶切反應(yīng)。

自備試劑:無(wú)水乙醇。

QQ截圖20240110094643.jpg


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PCR基本步驟及注意事項(xiàng)?

一、實(shí)驗(yàn)原理

PCR是體外人工選擇性擴(kuò)增DNA的一種方法,它類(lèi)似于生物體內(nèi)DNA的復(fù)制。在生物體內(nèi)DNA復(fù)制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而體外PCR反應(yīng)同樣需要類(lèi)似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設(shè)計(jì)的特定序列,實(shí)現(xiàn)對(duì)特定位置的擴(kuò)增;PCR Buffer提供一個(gè)反應(yīng)的緩沖環(huán)境;反應(yīng)過(guò)程同生物體內(nèi)一樣,DNA雙鏈打開(kāi),引物結(jié)合模板,延伸形成新鏈。而這些過(guò)程在生物體內(nèi)靠DNA解旋酶解鏈,而在體外在通過(guò)控制反應(yīng)溫度實(shí)現(xiàn)的。如常用94℃變性模板DNA打開(kāi)雙鏈,在退火溫度處引物結(jié)合到模板上,最后在72℃完成延伸,并反復(fù)重復(fù)此過(guò)程即可實(shí)現(xiàn)對(duì)特定片段DNA的大量擴(kuò)增。到第三循環(huán)開(kāi)始才產(chǎn)生出和靶DNA區(qū)段相同的DNA分子,進(jìn)一步循環(huán)地產(chǎn)生出靶DNA區(qū)段的指數(shù)加倍。

在擴(kuò)增后期,由于產(chǎn)物積累,使原來(lái)呈指數(shù)擴(kuò)增的反應(yīng)變成平坦的曲線,產(chǎn)物不再隨循環(huán)數(shù)而明顯上升,這稱(chēng)為平臺(tái)效應(yīng)。平臺(tái)期(Plateau)會(huì)使原先由于錯(cuò)配而產(chǎn)生的低濃度非特異性產(chǎn)物繼續(xù)大量擴(kuò)增,達(dá)到較高水平。因此,應(yīng)適當(dāng)調(diào)節(jié)循環(huán)次數(shù),在平臺(tái)期前結(jié)束反應(yīng), 減少非特異性產(chǎn)物。到達(dá)平臺(tái)期(Plateau)所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。

二、主要的成分

1.模板可以是多種形式,主要包括基因組DNA、質(zhì)粒DNA、攜帶病毒的基因組DNA、PCR產(chǎn)物,cDNA等,但不能為RNA。對(duì)于不同類(lèi)型的模板,其主要不同在于預(yù)變性的時(shí)間以及模板的量。一般對(duì)于大的基因組DNA預(yù)變性時(shí)間10min足夠,質(zhì)粒DNA2min、攜帶病毒的基因組DNA預(yù)變性2min、PCR產(chǎn)物預(yù)變性2min即可。

注意cDNA為單鏈DNA,但仍可做PCR的模板,只不過(guò)在第一輪循環(huán)時(shí)只有一個(gè)引物結(jié)合,合成另一條鏈。從第二輪開(kāi)始,兩個(gè)引物均與特異位點(diǎn)結(jié)合,從而實(shí)現(xiàn)了與常規(guī)PCR的接軌。而同作為單鏈的RNA卻不能進(jìn)行PCR擴(kuò)增,原因就在于實(shí)現(xiàn)PCR反應(yīng)的是DNA聚合酶,只能特意識(shí)別DNA鏈。

2.對(duì)于模版的量來(lái)說(shuō),一般25ul體系DNA的質(zhì)量為50—100ng。對(duì)于基因組DNA由于其結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜,提取的濃度也往往比較大,為防止?jié)舛冗^(guò)大對(duì)PCR造成影響,故需對(duì)提取的DNA進(jìn)行梯度稀釋。否則濃度過(guò)高則可能會(huì)引起非特異性擴(kuò)增。對(duì)于質(zhì)粒及PCR產(chǎn)物由于其結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,且提取濃度一般較低,則無(wú)需稀釋。

PCR實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該注意的問(wèn)題有哪些?

沒(méi)有ct值

檢測(cè)結(jié)果遇到?jīng)]有Ct值情況,排查是否有以下問(wèn)題:

1、循環(huán)數(shù)不夠(一般不超過(guò)45循環(huán),不僅背景值提高,定量也不準(zhǔn));

2、PCR程序設(shè)置錯(cuò)誤,檢測(cè)熒光信號(hào)的步驟有誤。一般SG法采用72℃延伸時(shí)采集,TaqMan法則一般在退火結(jié)束時(shí)或延伸時(shí)采集信號(hào),另外熒光采集是否選中;

3、引物或探針降解??赏ㄟ^(guò)PAGE電泳檢測(cè)引物和探針是否降解;

4、模板量可能降解或上樣量不足(不超過(guò)500ng,根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)即可), 對(duì)未知濃度的樣本應(yīng)從系列稀釋樣本的最高濃度做起;如果發(fā)生模板降解,應(yīng)考慮樣本準(zhǔn)備中雜質(zhì)的引入及反復(fù)凍融的情況,建議將模板樣本小量分裝儲(chǔ)備,避免反復(fù)凍融;

5、引物探針是否合適(尤其是引物跨越內(nèi)含子,以確保擴(kuò)增基因組DNA;上下游引物Tm值超過(guò)4℃以上也會(huì)影響擴(kuò)增)。

ct值過(guò)晚

在相對(duì)定量中, Ct值一般控制在15—25之間比較好,如果在絕對(duì)定量中, 對(duì)低拷貝數(shù)的樣品,Ct值會(huì)增大, 但是一般不宜超過(guò)40循環(huán), 否則定量不準(zhǔn)確。

因此,判斷Ct值出現(xiàn)過(guò)晚是否屬于非正常情況, 需要根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和目的進(jìn)行。

1、擴(kuò)增效率低。引物之間或者引物和探針的比例不合適, 需要進(jìn)行優(yōu)化;引物或探針設(shè)計(jì)不合理, 需要重新設(shè)計(jì);

2、PCR程序不合適, 改用三步法進(jìn)行反應(yīng), 或者優(yōu)化退火/延伸溫度, 可以適當(dāng)降低退火溫度; 退火/延伸時(shí)間短(可以在推薦的時(shí)間條件下延長(zhǎng)10s);

3、MgCl2濃度不合適,增加鎂離子濃度等。PCR各種反應(yīng)成分的降解或加樣量的不足;

4、PCR產(chǎn)物太長(zhǎng)。PCR產(chǎn)物設(shè)計(jì)超過(guò)500bp;

5、模板中存在抑制物。用高純度模板進(jìn)行PCR檢測(cè)或?qū)⒛0暹M(jìn)行稀釋。

公司正在出售的產(chǎn)品:

豬札如病毒(札幌病毒)染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

凋亡相關(guān)蛋白激ELISA試劑盒 DAPK免費(fèi)代測(cè)試劑

脊髓灰質(zhì)炎病毒通用型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

川楝子染料法PCR鑒定試劑盒

補(bǔ)體C5轉(zhuǎn)化ELISA試劑盒 C5c免費(fèi)代測(cè)試劑

同人皰疹病毒4PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)

小腸結(jié)腸耶爾森菌PCR檢測(cè)試劑盒

結(jié)締組織活化肽ⅢELISA試劑盒

牡蠣包拉米蟲(chóng)探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

班氏絲蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒

補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白ELISA試劑盒

貉源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒

流產(chǎn)嗜衣原體染料法熒光定量PCR試劑盒

垂體腫瘤轉(zhuǎn)化1相互作用蛋白ELISA試劑盒

犬細(xì)小病毒探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

犬副流感病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

大型中性氨基轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1ELISA試劑盒

植物源性成分PCR檢測(cè)試劑盒

犬流感病毒11型探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

蛋白ATP1B4ELISA試劑盒

牛輪狀病毒B組探針?lè)晒舛?/span>RT-PCR試劑盒

淋球菌PCR檢測(cè)試劑盒

蛋白酪氨激ELISA試劑盒

馬肺炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

兩岐雙岐桿菌PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)

低氧誘導(dǎo)因子2ELISA試劑盒

莫拉氏菌屬通用PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

禽致病性大腸桿菌1血清型探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

-3ELISA試劑盒

莫氏立克次體探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

科恩酒曲菌PCR檢測(cè)試劑盒直銷(xiāo)

人胱抑B(CSTB/CST6/STFB)試劑盒ELISA

牛輪狀病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒

禽白血病病毒J(ALV-J)PCR檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR)

人水通道蛋白0(AQP-0)ELISA試劑盒

火麻仁探針?lè)?/span>PCR鑒定試劑盒

登革病毒1型探針?lè)晒舛?/span>RT-PCR試劑盒

人分泌型卷曲相關(guān)蛋白1(SFRP1)檢測(cè)試劑盒elisa

消化鏈球菌通用PCR檢測(cè)試劑盒

巴西利什曼蟲(chóng)

P53抗體試劑盒ELISA

石蠟組織基因組 DNA 快速提取試劑盒腺病毒F型探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

乙型肝炎病毒核定量及YMDD變異聯(lián)合PCR測(cè)定試劑盒

人白細(xì)胞抗原DR(HLA-DR)檢測(cè)試劑盒elisa

牛莫拉氏菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

 


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